细胞实行

罕见题目FAQ

Q: CCK-8试剂盒检测细胞增殖和毒性的好处有哪些?

A: A: CCK- 8较传统的MTT法好处在于

1) MTT被线粒体内的一些脱氢复原酶复原成的formazan不是水溶性的，必要有特定的消融液来消融而CCK- 8发生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的消融步调，

2)CCK-8检测敏捷度更高，愈加波动;

3)酚红和血清对其测定无分明影响;

4)不用去上清，不用洗,涤细胞愈加轻便;

5)对细胞无分明毒性，参加显色后，可以在差别工夫重复用酶标仪读板使检测工夫愈加机动，并且不影响细胞举行后续实行。

Q :在做细胞的加药实行时，药物对CCK-8测定能否有影响?怎样办理?

A: 1)留意假如药物具有复原性(如维生素C)，会和CCK-8产生显色反响增长吸光度。

2)药物中的金属对CCK-8显色有影响:当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会克制5%,15%, 90%的显色反响使敏捷度升级。假如终浓度是10mM的话，将会100%克制。办理措施:起首要确认药物能否有吸取,在含有药物的培育基中参加CCK-8,测定450nm的吸光度假如它的吸光度比不含药物的培育基(加CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前改换培育基，去失药物的影响。

3) 由于培育基中大概含有氧化复原反响的物质，在正式实行之前发起利用逐一个孔作-一 下检测，有须要先确认培育基和CCK-8能否反响。-般正常的0D值应该在0.4以下。

Q: CCK-8怎样设定空缺比较?

A :在不含细胞的培育基中参加CCK-8.培育-定的工夫，测定450nm的吸光度即为空缺比较。 在做加药实行(细胞毒性实行)时，还应思索药物的吸取可在不含细胞.参加药物的培育基中参加CCK-8,培育-定的工夫，测定450nm的吸光度作为空缺比较。

Q: CCK-8关于差别的细胞，敏捷度能否-样?

A:纷歧样,悬浮细胞较贴壁细胞难染色。关于贴壁细胞,一般参加CCK 8培育1-4小时吸光度曾经很高，但关于悬浮细胞则大概吸光度较低，可以经过延伸CCK-8的参加工夫或增长细胞数目来办理。

Q :能否接纳CCK-8法举行肿瘤细胞的基质黏附实行?

A :可以，以层粘连卵白(Ln)包被96孔板经过盘算差别工夫点孔板中贴壁细胞的数目反应细胞的黏附性。细胞的黏附性越强，则单元工夫内贴于铺有L n板底的细胞数目越多去除尚末贴壁的细胞后,使用CCK-8等办法计量细胞数目便可直接反应差别细胞或差别处置的细胞黏附才能的差别。

Q :能否接纳CCK-8法举行药物的IC50检测?

A :可以，将细胞培育后依照差别浓度的药物处置定工夫落伍行CCK-8检测，依据吸光度绘制曲线，盘算该药物克制细胞数目一半时的浓度(IC50)。

参考文献

1. Ishiyama M, Miyazono Y, Sasamoto K, et al. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a

chromogenicindicator for NADH as well as cell viability. Talanta 1997.44(7): 1299-1305.

2. Ishiyama M, Tominaga H, Shiga M, et al. A combined assay of cell viability and in vitro cytotoxicity

with a ，highlywater-soluble tetrazolium salt,

neutral red and

crystal violet.Biol Pharm Bull

###1520.

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