实行意义

荧光定量PCR (Realtime fluorescence quantitative PCR, qPCR)也称作及时荧光定量PCR。便是在PCR的扩增历程中，经过荧光的信号，对PCR的历程举行及时的定性、定量检测， 后经过尺度曲线对初始模板举行定量剖析的办法。

检测方法有SYBR Green染料法和Taqman探针法两种方法。

探针法与染料法的优缺陷

1.探针法经过探针可以增长反响搜集信号的特异性，只要探针联合的片断上产生扩增才干搜集到信号，可以用多重系统反响的办法，可以展望和提早举行反响条件的优化,缺陷是要分解探针，本钱高，周期长。

2.染料法经济实惠，可以做消融曲线，剖析所有PCR产品的TM值，缺陷便是特异性没有探针法好。

实行标本搜集及保管办法：

1：病理标本搜集及保管：

1）冰冻切片：取下得当的构造块放于液氮保管；   

2）白腊切片：取下得当的构造块放于4%多聚甲醛保管；

3）细胞爬片：细胞爬片4%多聚甲醛牢固30min，换PBS浸没4℃保管。

2：分子生物学标本搜集及保管：

1）奇怪构造：切割标本后放于液氮大概-80℃冰箱保管；            

2）白腊标本：常温保管；

3）全血标本：取过量全血参加EDTA或肝素抗凝采血管；           

4）体液标本：高速离心取沉淀；

5）细胞标本：细胞加TRizol裂解后液氮大概-80℃冰箱保管。

3：卵白质实行标本搜集及保管：

1）奇怪构造：切割标本后放于液氮大概-80℃冰箱保管；     

2）全血标本：取过量全血参加EDTA或肝素抗凝采血管；      

3）细胞标本：细胞加细胞裂解液充实裂解后液氮大概-80℃冰箱保管。

4：ELISA、放免、生化实行标本搜集及保管：

    1）血清（血浆）样本：取全血参加促凝管（抗凝管），2500转离心20分钟左右，搜集上清，液氮大概-80℃冰箱保管；

    2）尿液样本：样本2500转离心20分钟左右，液氮大概-80℃冰箱保管；胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液参照此实验；

3）细胞样本：检测排泄性的成份时，样本2500转离心20分钟左右，液氮大概-80℃冰箱保管；检测细胞内的成份时，用PBS浓缩细胞悬液，经过重复冻融，以使细胞毁坏并放出细胞内成份，2500转离心20分钟左右，搜集上清同上；

4）构造样本：切割标本后，称取分量，用液氮大概-80℃冰箱冷冻保管备用。

5：代谢组学标本搜集：

    1）尿液样本：样本2500转离心20分钟左右，液氮大概-80℃冰箱保管；胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液等参照此实验；

    2）构造样本切割标本后，称取分量，用液氮大概-80℃冰箱冷冻保管备用；

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