本试剂盒只能用于迷信研讨，不得用于医学诊断

大鼠（Rat）核转录因子（NF-kB）ELISA检测试剂盒

利用阐明书

检测原理

试剂盒接纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。往事后包被核转录因子（NF-kB）抗体的包被微孔中，顺次参加标本、尺度品、HRP标志的检测抗体，颠末温育并彻底洗濯。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终极的黄色。颜色的深浅和样品中的核转录因子（NF-kB）呈正相干。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），盘算样品浓度。

样品搜集、处置及保管办法

1.  血清：利用不含热原和内毒素的试管，操纵历程中制止任何细胞安慰，搜集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞敏捷警惕地分散。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  构造匀浆：将构造参加过量心理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保管：假如样本搜集后不实时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，制止重复冻融，在室温下冻结并确保样品匀称地充实冻结。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操纵留意事变

1.  试剂盒保管在2-8℃，利用前室温均衡20分钟。从冰箱取出的稀释洗濯液会有结晶，这属于正常征象，水浴加热使结晶完全消融后再利用。

2.  实行中不必的板条应立刻放回自封袋中，密封（高温枯燥）保管。

3.  浓度为0的S0号尺度品即可视为阴性比较大概空缺；依照阐明书操纵时样本曾经浓缩5倍，终极后果乘以5才是样本实践浓度。

4.  严厉依照阐明书中标明的工夫、加液量及次序举行温育操纵。

5.  一切液体组分利用前充实摇匀。

试剂盒构成

注：尺度品（S0-S5）浓度顺次为：0、75、150、300、600、1200 pg/mL

试剂的预备

 20×洗濯缓冲液的浓缩：蒸馏水按1：20浓缩，即1份的20×洗濯缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板办法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗濯液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，云云洗板5次。

2.  主动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操纵步调

1.  从室温均衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置尺度品孔和样本孔，尺度品孔各加差别浓度的尺度品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本浓缩液40μL；空缺孔不加。

4.  除空缺孔外，尺度品孔和样本孔中每孔参加辣根过氧化物酶（HRP）标志的检测抗体100μL，用封板膜封住反响孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗濯液，静置1min，甩去洗濯液，吸水纸上拍干，云云反复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔参加底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔参加停止液50μL，15min内，在450nm波优点测定各孔的OD值。

后果判别

 绘制尺度曲线：在Excel事情表中，以尺度品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出尺度品线性回归曲线，按曲线方程盘算百般本浓度值。

试剂盒功能

1.  正确性：尺度品线性回归与预期浓度相干系数R值，大于即是0.9900。

2.  敏捷度：最DI检测浓度小于5.0 pg/mL。

3.  特异性：不与别的可溶性布局相似物交织反响。

4.  反复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保管。

6.  无效期：6个月

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